北京GMP无菌实验室的运行及管理

GMP无菌实验室的运行及管理

　　一、室内环境管理(guǎn lǐ)
无菌实验室设有无菌操作间、缓冲间和更衣间，无菌操作间洁净度达到10000级，超净台洁净度达到100级且室内温度应保持在20~24℃，湿度保持在45%~60%[1]，此设置不仅满足人体舒适度且又不利于室内微生物的生存。PCR实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于对健康成年人已知无致病作用的微生物，如用于教学的普通微生物实验室等。初效、中效过滤器需要6个月更换1次，高效过滤器需要每年更换1次，以保证室内洁净度达到标准。紫外灯达到使用寿命(lifetime)会影响消毒灭菌的效果，应定期巡查更换，同时应加强其他指标的监测，如洁净度、细菌菌落数、静压差和风量等。

　　二、物流管理
经过γ射线灭菌的细胞培养瓶、培养皿、移液管、离心管等用1000mg/L浓度的消毒液彻底擦拭器材表面，消毒后放置于传递窗中，紫外灯照射30min后方可带入实验室。PCR实验室国家实验室代表国家最高水平，是按国际一流标准建立的，规模非常大，基本包括本学科领域所有研究方向，而且人员配备上要求面向国内外招聘最优秀的研究人员，直接参与国际竞争，往往是多学科交叉的创新平台。高压消毒的器材如止血钳、治疗盘、离心套管等要用包布包裹2层，经高压蒸汽灭菌和烤箱烘干后使用。使用前应检查物品包裹内外各种监测指示剂是否符合要求，再决定使用。贮存器材可放入无菌室的柜橱内，若超过有效期应重新灭菌。进包装间要严格洗手，穿工作衣、戴口罩、帽子，包装前检查包布、治疗巾，应清洁干燥无破损，做到一用一洗一消毒，各类器材应光洁无锈、性能完好齐全。
外用3M化学指示胶带封贴并注明品名、包装者、查对者、灭菌期及有效使用期，各类灭菌包包扎应松紧适度、整齐，减少各种感染的机会。所有实验室器材需在最外层传递窗中用紫外灯照射30min后方可带入缓冲间。灭菌包需在缓冲间内剥去最外层包布后方可带入无菌操作间。在无菌操作间内剥去内层包布后摆放到固定(fixed)位置备用。实验室内各种器材要排放有序，定期检查，补充基数。为保证洁净度，应严禁堆放杂物，以防污染。污敷料及垃圾废液等应分别放入专用废液缸和污物桶中，待操作完毕后移出实验室。彻底清洁室内物品及地面，减少污物在室内的停留时间。

  对已污染或疑似污染培养基、细胞因子等应立即丢弃。动物（SPF级）实验室每类生物安全防护实验室根据所处理的微生物及其毒素的危害程度各分为四级。各级实验室的生物安全防护要求依次为：一级最低，四级最高。实验室设定了单独的阳性工作区域，包括阳性无菌(意思：没有活菌)操作间、缓冲间和更衣间。阳性工作区域与阴性工作区域完全隔离，防止肝炎病毒通过血液及相关物品等感染阴性患者回输的细胞，防止患者通过细胞回输感染乙肝病毒。工作人员进入阳性区域后，不得再进入阴性区域，阳性间每次使用的洗手衣需加入1000mg/L浓度消毒液，洗涤晾干以备下次使用，每次进入阳性间所着一次性隔离衣在用后应弃于阳性间垃圾袋中，阳性液体污物应瓶装密封后放入阳性间医疗垃圾袋中。阳性医疗垃圾袋从阳性间的传递窗中传出，放入专用医疗垃圾桶中，由院内专人负责回收。


　　三、运行制度管理
工作人员于每次实验操作前30min打开实验室空气净化系统和紫外灯。如果实验室长期不用，需要在实验前3h打开空气净化系统，以提高空气洁净度。在潮湿季节使用时，打开紫外灯时间需适当延长，以加强消毒效果，保证实验质量。进入无菌实验室的人员要严格着装，穿着经严格高压蒸汽灭菌过的洗手衣、隔离衣、口罩、帽子及用10g/L过氧乙酸溶液浸泡后晾干的拖鞋。着装程序如下：进入第一更衣间后脱掉外衣换一更拖鞋;随即进入第二更衣间，穿戴经高压蒸汽灭菌的一次性口罩帽子，着洗手衣换二更拖鞋，带无菌橡胶手套;进入第三更衣间后着隔离服，换三更拖鞋，之后方可进入无菌操作间操作。
保持实验室相对密闭状态，严格控制人员进出，必要情况下需要工作人员互相沟通协调时，可通过房间对讲电话联络，将工作人员出入次数降到最低，减少不必要的涡流形成，使室内的气压始终处于正压状态。各项操作要集中，操作过程要轻稳，不能在实验室抖动衣物布类，以防止微粒在室间飞扬，保证室间空气的洁净。实验室人员进入无菌（fungus)操作间应衣帽整洁、修剪指甲，严格执行无菌技术操作。一切操作必须在百级净化的超净工作台内进行，超净工作台在使用前需打开其紫外灯辐照灭菌30min以上，并同时打开超净工作台进行吹风。实验中应保持无菌操作，拿取物品不要跨过无菌面;培养瓶不要过早打开，对于已开瓶口者要尽量避免垂直放置;吸管等不能触及瓶口，以防细菌污染或细胞的交叉感染。每次操作过程中留取定量样品进行细菌、真菌、支原体检测(检查并测试)，以检查无菌操作的可靠性及细胞是否污染。操作完毕后应及时清理无菌实验室。组织实验室全体人员进行理论学习，明确无菌实验室工作原理、环境要求，设置严格的工作流程，明确分工并强化责任技师有效的合作配合意识。

　　四、卫生清洁管理
清洁工作应在实验室空气净化系统(system)运行中进行，清洁工具采用不掉纤维的织物材料制作。一切清洁工作必须采用湿式打扫，每周进行1次彻底清洁。需用1000mg/L含氯消毒液擦拭房间桌、椅、墙壁、天花板以及转凳、显微镜等固定在实验室内的物体。用体积分数为75%的酒精擦拭培养箱、超净台和紫外线灯管。地板很容易藏尘(如人体皮肤、毛发的脱落、布类的纤维等)、藏菌等，是室内的污染源，应在吸尘器吸除后用1000mg/L含氯消毒液擦拭。抽风、回风口也易藏尘、藏菌，应重点(zhòng diǎn)拆洗清洁，以确保尘埃过滤效果。卫生清洁时应用10g/L过氧乙酸溶液浸泡消毒工作人员所穿的拖鞋，待晾干后再使用。每周进行彻底清洁时应将实验室内物品如移液器、移液器枪头、止血钳、治疗盘(荨荨上接第76页荨荨)以及离心机套管等进行高压蒸汽灭菌。清洁工作完成后，手术室净化系统继续运行时间一般不应少于30min。
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